Los científicos y técnicos a menudo necesitan calcular la concentración de células en una suspensión. Por ejemplo, cuando a un paciente se le extrae sangre en el consultorio de un médico, el laboratorio puede usar ciertos métodos para buscar la cantidad de glóbulos blancos en un volumen de sangre determinado. Esto le da al médico mucha información sobre la salud de su paciente, especialmente su sistema inmunológico y si está luchando contra una infección u otra enfermedad. Pruebas como esta pueden buscar muchas otras células en la sangre, así como líquido cefalorraquídeo y otros fluidos corporales, como el recuento de espermatozoides en el semen con fines de fertilidad. Los científicos también calculan las concentraciones celulares de bacterias, levaduras y otros microorganismos para numerosos propósitos que van desde la investigación ecológica hasta las tecnologías industriales. Una de las técnicas más comunes también se enseña en muchas clases de biología de la universidad, y utiliza un dispositivo llamado cámara de conteo.
Antes de que la suspensión celular pueda entrar en la cámara de recuento, podría necesitar dilución porque podría contener miles o millones de células. En ese caso, las celdas no se pueden contar razonablemente. Para diluir la muestra, use una pipeta estéril para colocar diez microlitros de la solución celular en un tubo de ensayo que contiene 90 microlitros de un diluyente. El tipo de diluyente dependerá del tipo de célula. Mezclar bien Esta solución ahora está diez veces más diluida que la muestra inicial, por lo que su factor de dilución es 10-1. Etiquetalo. Repita esto varias veces, usando una pipeta estéril cada vez, hasta que la solución se diluya lo suficiente. Si lo diluyó por segunda vez, el segundo tubo de ensayo se diluyó 100 veces más que la solución inicial, por lo que el factor de dilución fue 10-2 y así.
Es posible que deba probar varias diluciones para determinar el factor de dilución correcto para la cámara de recuento. Una cámara de recuento es básicamente una caja rectangular muy pequeña, transparente, con una profundidad precisa y una cuadrícula precisa inscrita en la parte superior. También se conoce como hemocitómetro, o a veces hemocitómetro. El objetivo es que la suspensión se diluya lo suficiente como para que cuando se vea en la cámara de recuento, no se superpongan células, y se distribuyan por toda la rejilla de manera uniforme. Pipetee la suspensión diluida que contiene las células en el pozo en la cámara de recuento, donde se asentará en la cámara de rejilla a través de la acción capilar. Coloque la cámara de recuento en la platina del microscopio y visualícela a baja potencia.
La cuadrícula contiene cuadrados que están hechos de cuadrados aún más pequeños. Seleccione aproximadamente cuatro o cinco cuadrados, o cuantos necesite para contar al menos 100 celdas, en un patrón de su elección, como las cuatro esquinas y un cuadrado central. Si las celdas son grandes, estos podrían ser los cuadrados grandes, pero si las celdas son pequeñas, puede elegir los cuadrados más pequeños.
El volumen específico de cada cuadrado de la cuadrícula puede variar según el fabricante de la cámara de conteo, pero a menudo, la profundidad de la cámara es de 0.1 milímetros, el área de los cuadrados grandes es de 1 milímetro cuadrado y el área de los cuadrados más pequeños es de 0.04 milímetros cuadrados. Los cuadrados más grandes, entonces, tienen un volumen de 0.1 milímetros cúbicos. Para este ejemplo, suponga que contó un total de 103 celdas en cinco cuadrados, y que diluyó la muestra inicial hasta que el factor de dilución fue 10-2.
Si cada cuadrícula tiene un volumen de 0.1 milímetros cúbicos y se contaron cinco, entonces el volumen total de la cámara que se contó fue de 0.5 milímetros cúbicos, y había 103 celdas. Duplicado para hacerlo 1 milímetro cúbico lo convertiría en 206 celdas. Un centímetro cúbico es equivalente a 1 mililitro, que es una medida útil para líquidos. Hay 1,000 milímetros cúbicos en un centímetro cúbico. Por lo tanto, si hubiera habido un centímetro cúbico, o un mililitro, de suspensión, habría contado 206,000 (206 x 1,000) células. Así es como se ve como una ecuación:
Volumen de cuadrícula × número de cuadrados contados = volumen total de suspensión contada
Número de células ÷ volumen de suspensión contada = recuento de células por milímetro en cubos
Conteo de celdas por milímetro en cubos × 1000 = conteo de celdas por mililitro
Deberá tener en cuenta cualquier dilución realizada para que la solución inicial sea contable bajo el microscopio. En este ejemplo, el factor de dilución es 10-2. Para calcular la concentración inicial de la solución:
Recuento celular por mililitro ÷ factor de dilución = concentración celular
Para este ejemplo, el recuento de células por mililitro es 206,000, y dividiendo eso por 10-2 (0.01) da una concentración celular de 20,600,000 células por mililitro en la muestra inicial.