Contenido
- Ventaja: sensibilidad
- Ventaja: especificidad
- Desventaja: propenso a resultados falsos o subjetivos
- Desventaja: alto costo y demanda técnica
Western blot, una técnica analítica utilizada para identificar una proteína específica en una muestra dada, emplea la capacidad de una enzima o anticuerpo primario marcado con fluorescencia para unirse a su antígeno específico. Es un proceso de tres pasos que comienza con la electroforesis en gel, seguido de la transferencia de membrana y el sondeo con anticuerpos. La detección de proteínas puede ser directa o indirecta, y este último utiliza un anticuerpo secundario marcado dirigido contra el primario. Aunque se acepta como una técnica de análisis de proteínas de rutina, la transferencia Western tiene limitaciones y beneficios.
Ventaja: sensibilidad
Uno de los mayores argumentos a favor de Western Blot es su sensibilidad. Debido a su capacidad para detectar tan solo 0.1 nanogramos de proteína en una muestra, la técnica puede servir teóricamente como una herramienta de diagnóstico precoz eficaz, detectando incluso la más mínima respuesta inmunogénica de un virus o bacteria en una muestra de un paciente. Una transferencia Western indirecta se basa aún más en esta sensibilidad a partir de la capacidad del anticuerpo secundario para amplificar la intensidad de la señal detectada por el sistema de imágenes. Una mayor sensibilidad significa que se necesitan menos anticuerpos para las pruebas, lo que reduce significativamente los costos de laboratorio.
Ventaja: especificidad
La técnica de transferencia western debe su especificidad a dos grandes factores contribuyentes. Primero, la electroforesis en gel clasifica una muestra en proteínas de diferente tamaño, carga y conformación. Este proceso en sí mismo es un gran paso hacia la detección, ya que las bandas formadas en el gel ya dan pistas sobre el tamaño de la proteína o polipéptido de interés. La especificidad de la interacción anticuerpo-antígeno sirve como el segundo factor importante. Debido a que los anticuerpos específicos muestran afinidad por proteínas específicas, el proceso puede detectar selectivamente una proteína objetivo incluso en una mezcla de 300,000 proteínas diferentes.
Desventaja: propenso a resultados falsos o subjetivos
A pesar de su sensibilidad y especificidad, una transferencia Western aún puede producir resultados erróneos. Un resultado falso positivo es cuando un anticuerpo reacciona con una proteína no deseada, que es lo que ocurre con frecuencia cuando un paciente que se está haciendo la prueba del VIH tiene tuberculosis o una serie de infecciones parasitarias. Un falso negativo, por otro lado, puede resultar fácilmente si a las proteínas más grandes no se les da el tiempo suficiente para transferirlas adecuadamente a la membrana. La transferencia y el procesamiento incorrectos a menudo producen bandas sesgadas, desvaídas o incluso múltiples, lo que hace que los resultados de las pruebas estén sujetos a la interpretación del técnico.
Desventaja: alto costo y demanda técnica
El costo de una transferencia Western es una combinación de los grandes gastos individuales para anticuerpos etiquetados, analistas expertos y equipos de laboratorio. Un proceso delicado, la transferencia Western requiere precisión en cada paso para la identificación adecuada de los componentes de una muestra. Un error menor en la concentración de reactivo o en el período de incubación puede ser desastroso para todo el proceso. Finalmente, el equipo requerido para la detección y la obtención de imágenes (sistemas de detección quimioluminiscentes, fluorescentes, radiactivos o láser) puede ser demasiado costoso para la unidad de microbiología promedio.