Contenido
- TL; DR (demasiado largo; no leído)
- ¿Qué es la electroforesis?
- Preparación de gel insatisfactoria
- Demasiada muestra
- Muestra de mala calidad
¿Alguna vez te has preguntado cómo los científicos estudian pequeños fragmentos como tu ADN? Un método es la electroforesis en gel. Si bien la electroforesis generalmente produce bandas claras y fáciles de leer perfectas para la interpretación científica, los resultados manchados a veces oscurecen los datos.
TL; DR (demasiado largo; no leído)
La electroforesis en gel permite a los científicos visualizar muestras digeridas y medir el tamaño de los fragmentos. Los resultados del frotis de geles de agarosa mal preparados, cargando una muestra sin diluir en los pozos o utilizando muestras de baja calidad.
¿Qué es la electroforesis?
La electroforesis en gel es una forma para que los científicos visualicen muestras digeridas de pequeñas moléculas como el ADN y estimen el tamaño de esos fragmentos. Para realizar la electroforesis, los científicos preparan un gel suspendiendo la agarosa en agua hirviendo. La polimerización resultante produce polímeros de azúcar entrecruzados para que el gel se parezca un poco a una telaraña a nivel químico.
Los científicos usan un instrumento de corte para formar pozos en el gel para que puedan cargar cantidades muy pequeñas de muestras digeridas en los pozos. Al encender la máquina, la electricidad atraviesa el gel y los fragmentos de las muestras comienzan a viajar desde los pocillos hasta el otro lado del gel. Dado que el gel es similar a una red, los fragmentos más pequeños viajan a través de la matriz rápidamente, mientras que los fragmentos más grandes tardan más en ascender a través de la matriz. Cuando finaliza, el gel contiene bandas oscuras que representan cuán lejos viajaron los diferentes fragmentos. Los científicos miden estas bandas y usan un cálculo logarítmico para determinar el tamaño de cada fragmento en función de cuán lejos migró.
Los científicos esperan bandas claras, pero a veces las bandas manchan. Esta mancha es generalmente el resultado de geles mal preparados, cargando muestras no diluidas en los pozos o muestras de baja calidad.
Preparación de gel insatisfactoria
Cuando se trata de resultados manchados, un posible culpable es un gel mal preparado. Un gel satisfactorio se polimeriza uniformemente, produciendo una matriz uniforme en todo el gel en la bandeja de moldeo. Si parte del gel, generalmente la mitad inferior, se endurece antes de que el científico termine de verter toda la bandeja, el gel resultante será desigual y producirá resultados manchados.
Demasiada muestra
Antes de cargar las muestras en los pocillos, esas muestras deben diluirse lo suficiente como para atravesar el gel sin desbordar los pocillos. Si una muestra cargada está demasiado concentrada porque el científico olvidó diluirla o usó un factor de dilución inadecuado, los fragmentos serán demasiado grandes para los pozos y producirán manchas.
Muestra de mala calidad
Las manchas también son el resultado de una mala calidad de la muestra. Por ejemplo, una muestra de ADN contaminada con proteínas o que contiene demasiada sal puede producir manchas. Las muestras degradadas o desnaturalizadas también producen malos resultados, incluidas las bandas manchadas.
La electroforesis en gel es una forma increíble para que los científicos visualicen muestras digeridas y determinen el tamaño del fragmento. La preparación cuidadosa tanto del gel como de la muestra minimiza la posibilidad de manchas y produce bandas claras ideales para la interpretación científica.