Contenido
- Etilendiaminotetraacetato para la purificación de ADN
- Cloruro de Magneisum para la Amplificación de ADN
- Bromuro de etidio para la tinción de ADN
El análisis de ADN implica diferentes tipos de experimentos moleculares y procedimientos biológicos. El ADN es una materia prima frágil y complicada, por lo que su manipulación y análisis requiere la mejor calidad y la más pura preparación de productos químicos. Dependiendo del análisis, cientos de productos químicos, desde soluciones ácidas y básicas hasta tampones y colorantes, están involucrados en el estudio del ADN. Comprender por qué se utilizan algunos productos químicos es clave para realizar experimentos exitosos y obtener resultados precisos, confiables y reproducibles.
Etilendiaminotetraacetato para la purificación de ADN
Se purifican tres tipos de ADN para el trabajo científico: ADN del genoma (ADN genómico), todo el ADN de la célula (ADN total) o de plásmidos, que pueden multiplicarse automáticamente. La purificación total del ADN celular utiliza productos químicos que permiten la destrucción de muchas células de las membranas durante la lisis celular. El químico etilendiaminotetraacetato (EDTA) se usa a menudo para eliminar iones de magnesio, que son necesarios para mantener la rigidez de las paredes celulares, lo que hace que se debiliten hasta el punto de colapsar o desgarrarse, liberando el contenido de las células y el ADN para su análisis. Además, el EDTA protege y preserva la integridad del ADN al inhibir las enzimas que normalmente están presentes en la célula, que pueden fragmentar el ADN y dejarlo inutilizable.
Cloruro de Magneisum para la Amplificación de ADN
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un método de análisis sofisticado que se utiliza para amplificar varios miles de copias de una molécula de ADN, sin embargo, está llena de problemas técnicos e inexactitudes. Muchos científicos, por lo tanto, realizan rutinariamente varios conjuntos diferentes de PCR para encontrar la condición y los parámetros más óptimos para un gen particular de interés. Una sustancia química utilizada para llevar a cabo dicha optimización es el magnesio, que estabiliza la enzima ADN polimerasa utilizada en la PCR y actúa como un cofactor esencial para la actividad de la enzima. Para las PCR, el magnesio se usa en forma de un tampón de cloruro de magnesio.
Bromuro de etidio para la tinción de ADN
El bromuro de etidio es un colorante que se une al ADN al deslizarse entre los nucleótidos que forman una doble hélice de ADN en un proceso conocido como intercalación. Este tinte se puede iluminar con una lámpara ultravioleta, de modo que se pueda visualizar el ADN al que se ha unido el bromuro de etidio. Sin embargo, se requiere al menos 1 nanogramo de ADN para que el bromuro de etidio se vea correctamente, por lo tanto, es una forma de detectar ADN amplificado por PCR. Aunque es barato y ampliamente utilizado, también es un químico mutagénico que se sabe que causa cáncer, por lo que su uso en laboratorios está altamente regulado y muchos científicos están optando por utilizar alternativas menos tóxicas.