Contenido
- Dilución de muestras, enchapado e incubación
- Cuenta manual
- Recuento automatizado
- Hacer el conteo más complicado
Una de las formas clásicas de determinar la concentración de microbios en una muestra es diluir la muestra, hacer crecer los microbios en placas y contar las colonias. Los microbios plateados crecen desde una unidad formadora de colonias que consiste en una o más células en una colonia visible que se puede ver y contar. Las bacterias son los microbios más comunes para evaluar utilizando los recuentos en placa. Los recuentos de colonias se utilizan para detectar y contar microbios en el suelo, el agua y los alimentos. Los protocolos para contar colonias enfatizan un enfoque preciso y metódico.
Dilución de muestras, enchapado e incubación
Si simplemente unta una muestra de microbio en una placa de agar, verá tantas unidades formadoras de colonias que las colonias individuales se mezclarán, haciendo que sea imposible contarlas. Para resolver este problema, mezcle la muestra en un medio líquido, tome una pequeña cantidad de esa mezcla y diluya más. Repita este proceso de seis a 10 veces. Extienda la dilución final en una placa de agar e incúbela durante cuatro a siete días antes de contar las colonias.
Cuenta manual
El truco principal para contar colonias es contar cada punto de colonia una vez. Un enfoque es establecer la placa de Petri en un fondo de cuadrícula y contar las colonias en cada celda de la cuadrícula, moviéndose en un patrón metódico a través de todas las celdas. Marcar colonias contadas en la parte posterior de la placa de Petri también puede ser un enfoque útil. En general, deberá contar al menos tres platos; solo use placas que contengan de 30 a 300 colonias para hacer inferencias robustas, sugiere Microbiology Network, una empresa que brinda servicios de consultoría a laboratorios y fabricantes. Las placas con colonias que son demasiado numerosas para contar o con muy pocas colonias deben volverse a colocar en una nueva dilución.
Recuento automatizado
El error humano aumenta el tiempo involucrado en contar colonias manualmente. Para mejorar tanto la precisión como la eficiencia, coloque la placa de Petri en un dispositivo automático de conteo de colonias. Los contadores de colonias automatizados toman una imagen del plato, separan las colonias del fondo y luego usan un algoritmo para contar las colonias en el plato. Los algoritmos pueden tener dificultades para diferenciar colonias cuando dos o más colonias se tocan en los bordes, por lo que esta es un área de desarrollo continuo de software.
Hacer el conteo más complicado
La precisión de calcular la densidad de microbios a partir de recuentos de colonias tiene algunas limitaciones. Las unidades formadoras de colonias pueden ser una sola célula, una cadena de células o un grupo completo de células. La suposición es que una colonia representa una célula, por lo que las concentraciones calculadas a partir del recuento de colonias pueden ser bajas. Diferentes microbios necesitan diferentes condiciones de crecimiento, y las colonias en la placa solo representan aquellos microbios que prosperan en ese medio de crecimiento en esas condiciones de incubación. Además, el recuento de colonias no registra las células muertas, una consideración importante cuando se necesita la concentración de células en la muestra original.