Una enzima es una proteína que cataliza (aumenta la tasa de) reacciones químicas. La temperatura óptima de la mayoría de las enzimas, o la temperatura a la que las enzimas facilitan mejor las reacciones, está entre 35 y 40 grados centígrados. El aumento de la temperatura dentro de esta ventana aumenta la velocidad de reacción, ya que excita las moléculas y aumenta la velocidad a la que las enzimas / reactivos colisionan y reaccionan para producir el producto. Sin embargo, aumentar demasiado la temperatura puede desnaturalizar la enzima y evitar que funcione.
Determine la temperatura óptima de la enzima calentando la reacción en cantidades infinitesmales y tomando pequeñas muestras de la reacción, para determinar cuándo se produce la velocidad máxima de producción del producto.
Selecciona un método. Determine cómo va a medir la concentración de su producto en varios puntos del experimento. Por ejemplo, puede medir la concentración de muchos productos usando un espectrofotómetro y calculando la concentración a partir de la absorbancia, o midiendo la fluorescencia y calculando la concentración a partir de la fluorescencia.
Configura tu experimento. Coloque sus reactivos y enzimas en un recipiente pequeño con tapa, como un vial de centelleo. La reacción comenzará. Coloque el vial de centelleo en un vaso de precipitados más grande de agua a temperatura ambiente. Coloque el vaso de precipitados en una placa calefactora. Coloque un termómetro dentro del vaso de precipitados. Esto le permite medir la temperatura de la reacción en varios puntos.
Tome una muestra de 100 microlitros de la reacción a temperatura ambiente, aproximadamente 25 grados centígrados. Encienda la placa calefactora. A varias temperaturas entre 30 y 40 grados centígrados (30.5, 31, 31.5, etc.) tome muestras de 100 microlitros de su reacción.
Determine la concentración de su producto a cada temperatura. Cuando la temperatura se eleva por encima de los 40 grados centígrados, verá una disminución en la velocidad a la que el sustrato se convierte en producto, porque la enzima se desnaturaliza. El punto en el que el producto se produce a la velocidad máxima es el punto en el que la temperatura es óptima.