Contenido
- Diluciones seriadas
- Preparación de placas para calcular el título
- Contando y calculando el título de virus
- Advertencias
Calcular el título de un virus es una forma complicada de decir que un científico está contando el número de virus en una muestra en particular. Para calcular los títulos de virus, los científicos infectan placas de bacterias en crecimiento con soluciones virales en concentraciones variables y calculan la cantidad de virus en la solución original contando las bacterias que han muerto debido a la infección viral.
Diluciones seriadas
Póngase guantes, llene 10 tubos de cultivo con 9 ml de caldo y etiquételos como "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3", y así sucesivamente hasta "10 ^ -10". Estos tubos se utilizará para diluciones virales en serie utilizadas para calcular el título de fagos. Dado que los virus pueden crecer a concentraciones increíblemente altas, debe diluirlos para contarlos de manera efectiva. Cada tubo representa una dilución diez veces mayor del virus.
Tome 1 ml del cultivo de virus para el que desea calcular el título de fago y transfiéralo al tubo titulado "10 ^ -1" con una pipeta. Mezcle bien el tubo. Esta es tu primera dilución de diez veces.
Tome 1 ml del cultivo mixto de su tubo con la etiqueta "10 ^ -1" y transfiéralo con una pipeta nueva al siguiente tubo, con la etiqueta "10 ^ -2". Mezcle este tubo también.
Continúe este patrón para crear una serie de diluciones en serie. Terminará con 9 tubos de 9 ml y 1 tubo de 10 ml. Las cargas virales en sus tubos se diluirán entre 10 veces (su primer tubo) o 100 veces (su segundo tubo) hasta diez mil millones de veces (su tubo final).
Preparación de placas para calcular el título
Tome 10 tubos de agar blando de triptona y 10 placas de Petri y márquelos para que se correspondan con sus tubos de dilución en serie.
Afloje las tapas para que no se salgan al calor y luego coloque los tubos de agar en un vaso de agua hirviendo. Esto derretirá el agar para que puedas verterlo en placas de Petri.
Transfiera sus tubos a un set de baño de agua caliente a un mínimo de 45 grados Celsius. Esto asegurará que su agar no se solidifique en los tubos antes de que tenga la oportunidad de verterlo en una placa de Petri.
Agregue dos gotas de cultivo bacteriano a su agar y mezcle suavemente. Estas son las bacterias que se matarán, lo que le permite contar la cantidad de partículas de virus en una solución en particular.
Agregue 1 ml de cada dilución en serie a su tubo de agar correspondiente mientras los tubos todavía están en el baño de agua caliente. Por ejemplo, 1 ml de su dilución en serie 10 ^ -1 debe ir al tubo de agar con la etiqueta "10 ^ -1".
Mezcle cada tubo y luego vierta cada tubo en la placa de Petri con la etiqueta correspondiente. Esto creará una capa delgada de agar que se ha inoculado con bacterias y virus en cada placa. Deje crecer las placas durante la noche en una incubadora.
Contando y calculando el título de virus
Saque sus platos de la incubadora y examínelos. Debería ver áreas nubladas en toda la placa donde crecieron las bacterias, a excepción de pequeñas manchas claras llamadas placas. Estas placas son parches de bacterias muertas, y cada placa representa un virus.
Encuentre una placa que tenga entre 30 y 300 placas y cuente el número exacto de placas en esa placa.
Tome el número de placas en su plato y multiplíquelo por 10. Si contara 157 placas, obtendría 1570.
Multiplique el número que obtuvo en el paso anterior por el inverso del número en su tubo de dilución. Por ejemplo, si la placa que seleccionó era la placa 10 ^ -5, multiplicaría 1570 por 10 ^ 5 para obtener 157000000. Este número final es su título de fago y representa la cantidad de virus por ml de su cultivo original.