Contenido
La electroforesis en gel es un método utilizado en laboratorios para medir y clasificar hebras de ADN. Es necesario porque el ADN en condiciones normales es demasiado pequeño para manipular, incluso cuando se ve con la mayoría de los microscopios. El laboratorio de electroforesis en gel utiliza un procedimiento relativamente sencillo, y la misma técnica básica también se puede utilizar para separar proteínas individuales.
La matriz de gel
Para comenzar el procedimiento de electroforesis en gel, primero debe crear el gel. Por lo general, los geles se hacen en láminas delgadas utilizando una sustancia llamada agarosa. La agarosa en polvo se coloca en un matraz, seguido de una solución de agua salada llamada tampón. Esta mezcla de agarosa y tampón se calienta hasta que las dos sustancias se funden juntas, luego se vierte en un molde de formación. Luego se coloca un dispositivo llamado peine en un extremo del molde antes de que el gel se enfríe. Cuando se enfría el gel, se retira el peine, dejando pequeñas ranuras que se utilizarán para contener muestras de ADN.
Una característica especial de la mezcla de agarosa enfriada (llamada matriz de gel) proviene del hecho de que se crea con agua salada. Cuando se electrifica, la matriz se volverá conductora, permitiendo que la electricidad fluya a lo largo de su longitud. Otra propiedad especial de la matriz de gel es la presencia de agujeros microscópicos regulares. Estos agujeros permitirán que las cadenas de ADN viajen a través de la matriz de gel y facilitarán el proceso de clasificación.
La cámara de electroforesis
Su próximo paso es crear una cámara de electroforesis. Esta es una pequeña caja rectangular, cableada con una conexión eléctrica positiva y negativa en cada extremo. Las cámaras son típicamente poco profundas, lo suficientemente pequeñas como para caber en una mesa y construidas con materiales transparentes como el plexiglás.
La solución de agua salada se vierte en el fondo de la cámara de electroforesis, y la matriz de gel se sumerge ligeramente dentro de esta solución. El agua salada tiene dos propósitos: ayudar al flujo de electricidad y mantener húmeda la matriz de gel. Dado que el ADN es impulsado por una carga negativa, coloque su matriz de modo que sus muestras se ubiquen al lado de su conexión eléctrica negativa.
Preparando el ADN
Luego se preparan muestras de ADN. Como el ADN en solución es casi imposible de ver, se agrega un agente colorante llamado tampón de carga a cada muestra individual. Este agente también espesa la solución de ADN, haciéndola menos líquida y más viable. Con una pipeta, transfiera una muestra de solución de ADN a cada ranura alterna en la matriz de gel. En el espacio vacío entre cada muestra, coloque una solución de ADN cuya longitud ya conozca (llamada estándar de ADN) para el control y la comparación del experimento.
Conectar la alimentación
Ahora, encienda su cámara de electroforesis. Bajo potencia negativa, sus muestras de ADN serán forzadas a lo largo de la cámara. Pequeñas cadenas de ADN se moverán más rápidamente a través de la matriz de gel, y en un corto período de tiempo se separarán de las cadenas más largas y lentas. El tinte en el agente colorante le permite seguir el rastro del ADN. No podrá ver cadenas individuales de ADN, pero las cadenas de la misma longitud se agruparán.
Pasos finales
Cuando se clasifica el ADN, la matriz se retira de la cámara de electroforesis. Luego se tiñe el ADN para permitir una medición y un examen más fáciles.